ПЦР известна уже более 30 лет, ее используют во многих областях молекулярной биологии, в археологии и генетике. Полимеразная цепная реакция применяется для установки отцовства, диагностирования различных инфекционных болезней. Ее суть заключается в выделении малых концентраций фрагментов ДНК в биоматериале и увеличении их для постановки диагноза.

Что такое ПЦР

Точный метод диагностики позволяет выявить наследственные, инфекционные заболевания в острой и хронической стадиях, на этапе инкубации вирусов и бактерий. ПЦР является специфичным анализом, он очень точен и не может дать ложноположительный результат. Диагностика помогает найти возбудителя в гене, полученном из биоматериала.

Анализ дает точный результат при установке половых и скрытых инфекций, венерических заболеваний. Он предусматривает манипуляции с нуклеиновыми кислотами, чтобы установить отцовство, клонировать или вывести новые гены. Диагностика универсальна, высокочувствительна, не сопровождается перекрестными реакциями. Для анализа пригоден любой биоматериал пациента.

Где и зачем применяется метод ПЦР

Применять цепную полимеразную реакцию можно в разных областях и научных экспериментах. Особенности использования:

• криминалистика – для сравнения генетических материалов;
• установление отцовства – для установления родства между ребенком и предполагаемыми родителями;
• медицинская диагностика – ускорение и облегчение диагностики наследственных, вирусных заболеваний;
• персонализированная медицина – установление токсичности или аллергенности лекарств;
• клонирование генов – для получения белков, используемых в сельском хозяйстве, медицине;
• секвенирование ДНК – обнаружение родственных участков фрагментов цепи для выявления генетических предрасположенностей к болезням;
• мутагенез – внесение изменений в нуклеотидную последовательность.

Что выявляет исследование

В организме часто присутствуют скрытые инфекции, которые длительное время не проявляют себя. Метод цепной полимеразной реакции помогает их установить и выявить. Патологии, которые обнаруживаются при анализе:

• гепатит;
• кандидоз;
• уреаплазмоз половых органов;
• хламидиоз;
• папилломавирусная инфекция;
• герпес;
• раковые клетки;
• микоплазмоз;
• бактериальный вагиноз;
• трихомониаз;
• инфекционный мононуклеоз;
• гормональный фон;
• СПИД, ВИЧ.

Исследуемый биоматериал

Реакция ПЦР проводится с исследованием биоматериала, из которого выделяют ДНК или РНК. Для анализа берутся биологические жидкости и среды человека:

• моча – для изучения инфекционного поражения мочеполового тракта, мочевыделительных органов;
• мокрота – используется при диагностике туберкулеза, респираторных форм хламидиоза, микоплазмоза;
• сок простаты, спинномозговая, плевральная, суставная, околоплодная жидкости, слюна – по медицинским показаниям;
• эпителиальные соскобы (мазки) со слизистых – для диагностики гонореи, микоплазмоза, хламидиоза, уреаплазмоза, трихомониаза, герпеса, гарднереллеза;
• биоптаты двенадцатиперстной кишки, желудка – для выявления хеликобактерной инфекции;
• плазма, кровь, сыворотка – для выявления вирусов гепатита, герпеса, цитомегаловируса, ВИЧ, исследования генов.

Методика проведения исследования методом ПЦР

Цепная полимеразная реакция используется для проведения анализов и научных экспериментов. Выделяют техники ее проведения:

1. С обратной транскрипцией – для амплификации (увеличения объема), выделения или идентификации последовательности генов.
2. Инвертированная – для определения соседних последовательностей после вставки ДНК в геном. Она проводится, если известен небольшой участок внутри нужной последовательности.
3. Вложенная – последовательно проводятся две реакции.
4. Асимметричная – проводится для амплификации одной из цепей исходной ДНК для секвенирования, гибридизационного анализа.
5. Количественная – ПЦР в реальном времени, используется для наблюдения за измерением конкретного продукта в цикле реакции.
6. Ступенчатая – уменьшает влияние неспецифического связывания праймеров.
7. Групп-специфическая – используются консервативные праймеры.

Подготовка к процедуре

Анализ крови на ПЦР предполагает, что материал для исследования не должен быть загрязнен. Это позволит не получить необъективный результат. Меры подготовки:

• приготовить стерильные контейнеры для материала;
• сдавать анализ натощак утром;
• не проявлять половую активность в течение суток до исследования.

Расшифровка результатов

Результаты будут известны через 1,5–2 дня после процедуры. Иногда этот период занимает меньшее время. Расшифровка показателей:

1. Положительная ПЦР – в организме присутствует ДНК или РНК возбудителя.
2. Отрицательная – в биоматериале отсутствует искомый инфекционный штамм.

Метод исследования отличается высокой точностью, чувствительностью и специфичностью. Он помогает определить отсутствие или наличие инфекции в организме, указать тип заболевания, обнаружить следы возбудителя даже при низком содержании ДНК микробов в биоматериале.

Количественный и качественный анализ ПЦР

В некоторых случаях проводят количественное определение микроорганизмов, что актуально при заболеваниях, вызванными условными патогенами. Они проявляют свое негативное действие при избыточном количестве. Анализ важен для выбора терапевтической практики с целью контроля над лечением вирусов иммунодефицита человека, гепатита.

Качественный анализ помогает определить наличие конкретного вируса или инфекционного возбудителя. Для этого проводится сравнение фрагментов ДНК с образцами, которые поражены конкретным геном – гепатитом, герпесом. Исследование показывает наличие или отсутствие патогенов в крови, результатом служит показание – «обнаружено» или «не обнаружено».

Качественный тест имеет чувствительность. Это означает, что присутствие вируса в малой концентрации не даст себя обнаружить. Для контроля нужно использовать максимально чувствительную систему – не ниже 50 МЕ/мл.

Цена

В зависимости от вида исследования различается стоимость проведения ПЦР, в комплексе они дешевле. Примерные цены по Москве:

Видео